通过电沉积将Pd纳米颗粒沉积在玻璃碳电极（GCE）的表面上，然后在吸收了适量的活性氢后，将Pd纳米颗粒的修饰电极插入H2SO4溶液中，将其转移到HAuCl4溶液中，经过一定时间后，金被活性氢还原，并自发沉积在被Pd纳米粒子修饰的玻璃碳电极表面。过自组装将载有硫醇的凝血酶适体I固定在PdAu / GCE表面，以制备未标记的凝血酶适体传感器。
凝血酶结合到凝血酶适体上时，它会覆盖电极的表面，从而阻碍了H2O2电极表面上PdAu纳米颗粒的催化还原活性。过监测H2O2还原电流的减少，可以定量检测凝血酶。究了pH，孵育时间等实验条件对PdAu纳米粒子响应电流的影响以及协同效应。
体是通过指数富集的配体系统（SELEX）的进化技术筛选的功能性寡核苷酸的短片段[1]。些短核苷酸片段可用于灵敏和特异性检测。异性结合分子，例如金属离子，小的有机化合物，代谢产物和蛋白质[2，3]。抗体相比，适体具有明显的优势，如易于保存，可重复性好，易于修饰和实用的再生[4〜6]。
血酶[7]是人血中一种重要的丝氨酸蛋白，是一种蛋白水解酶，在止血的生理和病理过程中起关键作用。在脑出血后的病理生理中起着重要作用，而凝血酶活性的抑制对脑出血的治疗具有重要的临床意义[8，9]。此，凝血酶的检测在人类疾病的治疗中具有重要的价值。于电化学生物传感器的凝血酶检测已被广泛报道。Wang等。
[10]报道了一种标记的电化学适体传感器用于检测凝血酶，主要是通过两个凝血酶适体与靶标的特异性结合形成“三明治”结构。他的工作中，适体I被FcSH / SiNCs标记，适体II被固定在链霉亲和素修饰的磁珠的一端。出现凝血酶时，适体I和适体II与凝血酶特异性结合形成特殊的夹心结构。性检测范围为0.1至5.0 nmol / L，检测极限为0.06 nmol /L。[11]已经开发了一种基于量子点标记的电致发光传感器来检测凝血酶。测后，将凝血酶er适体附着在金电极上，并用量子点标记适体。为两个适体对同一靶标具有特异性结合，所以容易形成夹心结构，并且可以通过在其结合后适体的构型变化来检测凝血酶的浓度。性范围为0至20 mg / L。[12]开发了一种电化学免疫适体传感器，其适体附着在氧化石墨烯（GO）的表面。GO通过物理吸附附接到玻璃碳电极或金电极的表面。于氨基适体和氧化石墨烯表面上的COOH之间的化学键，该适体附着在石墨烯修饰电极的表面上。
能化的适体分为两个互补部分，Ru（phen）2 3整体包裹并用作探针。没有凝血酶时，Ru（phen）2 3在电极表面传感器上具有高电信号。入凝血酶后，适体与凝血酶特异性结合，Ru（phen）2 3电化学释放，信号减弱，确定凝血酶浓度。感器的线性范围为0.9 pmol / L〜226 nmol /L。[13]已经开发了一种电化学适体传感器，其使用核酸外切酶催化靶标回收，并使用该酶催化凝血酶的测定。3-巯基丙基三甲氧基硅烷的表面上注入大量的醇脱氢酶（ADH）后，显示出可变的多孔结构，然后将金纳米颗粒固定在其表面上以催化NADH，为了改善电化学反应信号，在DNA-da的一端标记了亚甲基蓝。
出现凝血酶和Recjf的混合物时，凝血酶apt的适体和适配体特异性结合，此时核酸外切酶在5’，3’方向降解凝血酶适体Ⅱ，释放出凝血酶L酶进入溶液，游离凝血酶与适体II结合，完成靶标的回收和电化学信号的放大，传感器的线性范围为5 pmol / L〜100 nmol /L。标记的电化学适体传感器必须经历复杂的修饰过程，这既复杂又昂贵。等。[14]开发了一种未标记的凝血酶适体传感器，该传感器基于二茂铁负载的聚乙烯亚胺，DNA适体和自组装多层碳纳米管的多层膜。感器的线性范围为0.3至165μg/ L，检测极限为0.14μg/L。本研究中，准备了一种未标记的电化学适体传感器，用于灵敏而快速的检测凝血酶。先，通过电化学方法将PdAu纳米颗粒沉积在玻璃碳电极表面，然后通过AuSH之间的强键将凝血酶适体Ⅰ固定在表面上；当凝血酶与凝血酶适体结合时，覆盖电极表面，从而阻碍了电极表面上PdAu纳米颗粒对H2O2的催化还原活性，监测还原电流的降低通过检测H2O2的含量，可以定量检测凝血酶。过SEM观察到PdAu纳米颗粒的微观形貌（图2），颗粒均匀地分散在GCE的表面上，平均粒径约为100 nm。米微粒的催化作用与其表面相连。常，纳米颗粒的催化反应是表面反应，该反应主要与催化剂的比表面和活性中心有关[16]。
子半径越小，表面能越大，总表面积越大，催化作用越大。外，当粒径在1至10 nm之间时，会发生量子效应并成为量子化的粒子，这将导致明显的带隙变宽，从而使电子-空穴对具有更大的氧化还原能力，催化活性会随尺寸而变化。化程度增加。寸的量化还允许半导体获得更高的电荷传输速率，大大降低了空穴和电子的复合的可能性，并且也有利于提高半导体的效率。化反应。是同时，大的表面意味着在表面上有更多的重组中心，当重组起主要作用时，活性也会随着定量的增加而降低。H2O2催化随着粒径的增加而降低。化学阻抗是检测电极表面改性状态的常用工具，图5显示了在制备过程的不同阶段，TrisHCl溶液中改性电极的交流阻抗图。感器。线a是裸GC电极的阻抗图，大约为一条直线，恒温阀芯表明电子到电极表面的转移仅受扩散控制。
线b是Pd NPs / GC电极的阻抗图，阻抗值Ret = 450kΩ。线c是PdAu NP / GC电极的阻抗曲线。抗值Ret = 400kΩ，主要是因为当在电极上修饰金纳米粒子时，电极表面上金属纳米粒子的数量增加，而电极表面和电极表面的金属纳米粒子数量增加。决方案。子转移；曲线d是复合膜凝血酶适体Ⅰ/ PdAu NPs修饰的电极的阻抗曲线，Ret = 800kΩ，因为修饰电极后在电极表面形成了绝缘层适体。线e是与目标凝血酶结合的改良凝血酶适体I / PdAu NPs电极的阻抗图，阻抗值急剧增加，直到Ret = 1800kΩ。是由于凝血酶，绝缘蛋白分子和电极表面上的适体结合形成较大的复合物，阻碍了电子的转移，表明凝血酶是与电极上的凝血酶适体Ⅰ有关。了研究这种传感器的实用性，本实验测量了稀释10倍的人血清样品中凝血酶的回收率。果列于表1。均回收率为98.5％，表明该传感器可用于测定凝血酶。用电化学沉积方法对玻碳电极表面的PdAu纳米粒子进行修饰，然后将凝血酶适体固定在其表面上，构建了一种新型的未标记适体传感器。凝血酶与适体结合时，它会覆盖PdAu的表面。止其催化H2O2还原反应。果，H 2 O 2还原电流随着凝血酶浓度的增加而减小，这可以帮助检测凝血酶。
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