建立了一种通过表面等离子体共振FT（FTSPR）检测柠檬黄食用色素的方法。用柠檬黄和柠檬黄单克隆抗体的特异性结合原理，将羰基二酰亚胺法制备的柠檬黄牛血清白蛋白结合物成功连接到检测芯片上，恒温阀芯并通过竞争法进行检测。解决方案中。檬黄。立标准曲线，检测限为13μg/L。究了pH对检测的影响，并获得了7.4的pH作为适当系统的酸度。
收经验，实际样品检测和干扰实验表明该方法为柠檬黄色。选择性。
UV检测方法相比，酒石黄的FTSPR传感器检测方法具有选择性高，检测限低的优点。品色素广泛用于日常食品中。成颜料因其颜色更鲜艳而更加通用，它们更便宜且用途更广。而，在合成染料中含有RNNR键，苯环或a吨结构的化合物具有降低的安全性并且用途有限。年来，由色素引起的食品安全事件凸显了对敏感方法和检测方法的迫切需求。
檬黄是一种可溶于水的合成偶氮颜料。是最常用的颜料之一[1]，但由于其安全性，其使用也受到限制。2007年，英国南安普敦大学发表了一项关于人工人工色素对儿童发育的影响的研究：包括酒石黄和橙黄色在内的七种人工色素可以使儿童的智商降低5个百分点。
后，科学家进一步研究了酒石黄的危害：Kamel [2]和Soltan [3]分别给Wistar雄性大鼠和柠檬黄小鼠喂食，发现柠檬黄和ADHD ，焦虑，抑郁和其他行为具有直接的因果关系，并且小鼠的肝脏和肾脏组织发生了变化。浓度的酒石黄可能增加雄性小鼠精子畸形的速度，并具有一定的诱变潜力[4]。于过度使用酒石酸的风险，紫外可见分光光度法[5，6]，荧光光谱法[7]，免疫酶法[8]，高效液相色谱法[9]和电被放置到位。学法[10]等。管这些方法获得了良好的应用效果，但是它们具有许多缺点，例如操作繁琐，持续时间长，剂量高，灵敏度低和特异性低。面等离子体共振（SPR）传感器是一种选择性，高灵敏度，无商标的检测，可以实现实时，快速和在线检测，以及其他好处[11]，在食品安全中已被广泛使用。Fernndez等。[12]使用多通道SPR传感器监测牛奶中的抗生素，例如恩诺沙星，磺胺嘧啶和氯霉素。Li等[13]使用SPR传感器检测食品中的霉菌毒素，并使用金纳米级来放大信号。该实验中，使用SPR生物传感器通过抗原-抗体相互作用的原理检测实际样品中的酒石黄[14]，并与紫外线检测的结果进行了比较。果表明，SPR测试对酒石黄的选择性更高，检出限（ng级）更低。
UV2450紫外可见分光光度计（日本岛津制作所），FTSPR表面等离振子共振仪（美国Thermo公司），旋转蒸发仪RE52AA（上海亚荣生化仪器厂），TGL20M高速冷冻台式离心机（长沙翔逸离心机）仪器有限公司； KQ200KD大功率CNC超声清洗仪（昆山超声仪有限公司），透析袋（27毫米，美国）。檬黄（Tartrazine，TE，95％），牛血清白蛋白（BSA，AR），硫羟丙烯酸（MPA，AR），羰基二乙基盐酸盐（1乙基（3二甲基氨基丙基））碳二亚胺，EDC，98％），N-羟基木丁二酰亚胺（ NHS，AR），日落黄（> 87％），胭脂红（AR），苏丹红I（AR），以上试剂均来自上海精纯试剂有限公司;黄色柠檬黄色小鼠单克隆抗体（渤海渤海生物试剂渤海公司），N，N-二甲基甲酰胺（AR，天津凯利达化学有限公司），盐酸盐酸（AR，东京化学工业）工业有限公司Ltd.，磷酸盐缓冲溶液（PBS），橙汁1和2在市场上购买。验用水是双蒸馏水。柠檬黄的紫外光谱法称重0.05 g的酒石黄，用PBS（0.02 mol / l）制备0.5 g / ml的溶液，然后在实验中稀释。用PBS作为参比和1 cm比色杯，在200至600 nm之间测量吸收光谱。备了一系列浓度梯度以测量λmax处的吸光度，并建立了吸光度浓度的标准曲线。适量的橙汁1并在0°C下以12，000 rpm离心30分钟，然后将上清液稀释5倍。过可见光分光光度法在紫外光下检测柠檬黄半抗原的制备，并平行测定三次。据文献[15]，酒石黄通过EDC方法与牛血清白蛋白偶联。于酒石azine分子含有羧基，因此中间体N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）可以与蛋白质的氨基结合形成蛋白质和小分子的结合物。所得的缀合物在透析袋中纯化，直至透析液为无色。
过紫外可见分光光度法表征所得的TEBSA产物。SPR传感器检测柠檬黄（1）检测方法溶液竞争法用于检测柠檬黄：分析物与相应的抗体混合，并穿过固定有分析物的传感器表面。保设置抗体量，以使响应信号与分析物浓度成正比。于抗体与结合的分析物结合回固定在传感器表面上的固定分析物，因此放大了响应信号。平衡量的分析物与抗体混合时，只有未与分析物结合的抗体才能与传感器表面的分析物结合。
此，响应信号与分析物的浓度成反比。先将MPA结合到芯片上，然后用EDC / NHS激活羧基，然后将TEBSA共轭物结合到芯片上，然后通过竞争法在溶液中检测出柠檬黄。
（2）SPR传感器的制备和再生在室温下，将金部件放入新的洗涤溶液（H2SO4在30％H2O4中浓缩，3：7，V / V）中2至3分钟，并大量去除水并再次使用。氮气干燥。干净的芯片置于10 mmol / L MPA溶液中，并在4°C下放置12 h。萃取液用大量乙醇和水洗涤几次，然后将芯片置于EDC（0.2 mol / L）/ NHS（0.05 mol / L）中1小时。时。混合物用大量水冲洗，并将芯片转移至TEBSA溶液（0.1 g / L，pH = 7.4）中12小时，用水取出，然后干燥。氮气。室温下，将芯片放入预先配置的乳液中10分钟，以去除芯片表面上的结合物。浸泡过程中必须振荡3至5次。开后，用水冲洗并用氮气干燥。FTSPR传感器检测到柠檬黄色并将已处理的芯片安装在仪器中，定义参数并使用PBS缓冲溶液作为流动缓冲液（所有实验测试溶液均在0.45μm膜上过滤并脱气超声），并将流速设置为1.20 mL / min，收集底部。集背景后，恒温阀芯固定流速为0.2 mL / min，并获得稳定的FTSPR基线。过循环泵将串联处理的石灰溶液引入流通池，并使之与固定在芯片上的TEBSA共轭物的表面接触。游离抗体与芯片上存在的结合物结合，并通过FTSPR实时记录波数。变化稳定时，再次传输PBS，直到信号稳定为止。品制备和检测在PBS中制备一系列的酒石黄溶液梯度溶液，并根据样品的最大浓度（通常与番茄红素1：1混合）选择所需量的抗体，以确保与分析物相比，抗体过量。
不同浓度的柠檬黄色溶液中加入相同量的抗体，孵育后，引入FTSPR传感器。别摄取50毫升橙汁1和2，并用旋转蒸发仪蒸发所有水，然后用PBS稀释至100毫升。
释至适当的倍数，并平行进行三次检测和测量。适量的500μg/ L橙黄色饮料稀释的柠檬黄色溶液1，孵育后，成功通过FTSPR传感器检测并平行测定3次。图1中可以看出，柠檬黄在426和257nm处具有吸收峰，在200nm处具有半吸收峰，在426nm处具有吸收峰。过线性调整获得的线性方程如下：A = 59.3286c（g / L） 0.0221，R2 = 0.9934。用作检测样品中酒石黄的基础。于3的信噪比，该方法的检出限为0.17 mg / L。用标准曲线，橙饮料1中的柠檬黄含量为21.7。mg / L，即转换后为0.02 g / kg，低于食品添加剂的卫生标准（GB27602007）[16]。
料中柠檬黄的最大用量为0.1克。/公斤。
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