河豚毒素传感器的响应性能与固定化细胞的数量和赋形剂的数量有关。生物体积设计为10μL，不添加辅助材料，并添加1％和2％辅助材料的3种类型的微生物膜。过夹心法固定微生物膜，并使用氧电极作为换能器组装微生物传感器。线性相关系数和峰回收率确定固定化膜的通透性和响应信号的大小，最后确定三种组合的最佳膜为10μL。菌悬浮液，并加入1％的佐剂。佳膜组件毒性传感器与高效液相色谱方法之间的差异尚不清楚，表明该试验建立的毒性微生物传感器方法可能是确定河豚毒素的毒性。豚毒素（TTX）是一种有效的神经毒素。前用于检测河豚毒素的方法是小鼠生物测定法[1]，以及高效液相色谱法[2]，免疫学方法[3]也日趋成熟。
生物传感器法[4]因其快速，快速，价格低廉而成为河豚毒素检测方法研究的重点。文献[5-8]中已经报道了地衣芽孢杆菌被用作应答菌株，并且以三明治方法制备了微生物传感器以测试其对河豚毒素的应答。性在10至100μg/ L的范围内更好。感器的响应性能与固定化细胞的数量和赋形剂的数量有一定关系。了提高微生物膜的重现性和测量范围的可行性，对微生物膜性能进行了测试，微生物量为10μL，辅助材料的量为0％，1％和2％。计了％的湿微生物细胞。过测量传感器的线性范围，线性相关系数和富集样品的回收率，以确定固定化膜的渗透性和响应信号的大小，可以确定细胞与赋形剂之间的最佳比例。了验证地衣芽孢杆菌毒性传感器的性能，将毒性传感器方法与河豚毒素高效液相色谱法进行了比较，以测试毒性传感器的测量准确性。GGA标准溶液：取质量浓度为150 mg / L的葡萄糖溶液和谷氨酸溶液，然后等体积混合，溶液中DBO5的质量浓度为（198±30.5） mg / L。试背景溶液（磷酸盐缓冲溶液）：称取KH 2 PO 4，Na 2 HPO 4 .12H 2 O 0.4539、5.970 g，并用1200 mL pH 7.6的蒸馏水稀释。
TTX储备溶液：称取1.0 mg TTX溶解在10.0 ml的软化水中（此时，溶液的浓度为100 mg / L。度更高且更易于储存作为TTX储备溶液存储并在4°C下存储直至使用。
准TTX溶液的制备：用标准TTX储备溶液稀释以制备10、20、45、50、75系列，100、100μg/ mL即用型标准溶液介质：牛肉提取物0.5 g，蛋白ept 0.5 g，可溶性淀粉0.5 g，氯化镁0.1 g，蒸馏水100 ml，pH 7.0醋酸纤维素膜（北京化学工业学校的子公司）Express超能凝胶（汉高胶粘剂有限公司），河豚毒素标准品（分析级，研究所）河北捕捞）；甲醇（色谱纯，天津康科）技术有限公司；乙酸（色谱纯，田金康科德科技有限公司）实验室用水为去离子石英水。定化微生物膜的制备少量液体悬浮液用于抽吸一定比例的悬浮在生物膜上的液滴，并将膜的两层夹在中间并保存使用。试程序河豚毒素毒性传感器的组装如图1所示。35°C，pH 7.6时，GGA浓度为21.5 mg / L的测试溶液在一定时间后，记录稳定电流I0的值。
后，将一定量的毒素溶液添加到背景溶液中，等待新的平衡，然后电流值再次稳定。流变化量ΔI（ΔI= It-I0）与TTX量成正比。TTX浓度在ΔI处的线性关系图。化的膜设计制备了三种类型的组合微生物膜，组合比例为10μL湿菌 0佐剂，10μL湿菌 1％佐剂，10μL湿细胞 2％d分别将赋形剂和河豚毒素组装在一起。毒传感器。I精密度测试：平行测量6次质量浓度为50μg/ L的TTX溶液的传感器响应信号，并测量其平均值，标准偏差和变化系数计算。准曲线设计：测定三种类型的有毒微生物传感器在不同浓度的TTX溶液中的响应，得出标准曲线，线性响应范围，线性方程式和线性相关系数。III针尖恢复测试：取TTX样品进行峰恢复测试。的选择。择流动相为乙酸和去离子水，总流速调整为8000 mL / min，乙酸起始流速为0.799、0.798、0.796、0.792， 0.790、0.788、0.785、0.783、0.780和0.780毫升/分钟分离情况。留时间流动相由乙酸和去离子水组成，并将浓度分别为50、75、100μg/ mL的TTX标准溶液以上述确定的速率注入液相色谱仪，色谱图为液相决定了保留时间。测波长的选择。
动相由乙酸和去离子水组成，在上述确定的流速和保留时间下测量了220、225、230、235和240 nm的波长峰，并且发现在上述色谱条件下TTX的最大吸收波长。试结果如表1所示。种毒性传感器的响应曲线如图2所示。表1和图2所示，三种固定方法的线性范围在10和80μg/ L且线性相关系数大于0.96。确度和准确性符合毒性测量的要求。生物传感器对河豚毒素进行了毒性试验，但是赋形剂含量为1％的微生物膜比其他膜具有更高的准确度，线性相关系数也优于其他膜。备的微生物膜的性能优于其他比例。
生物膜是三种比例微生物膜中的上层膜。制备地衣芽孢杆菌的有毒微生物膜时，向10μl细菌悬浮液中添加1％的赋形剂是细菌液和赋形剂之间的最佳比例。HPLC条件的确定如下：ODS色谱柱（150 mm x 6 mm，5μm），流动相由乙酸和去离子水组成，乙酸流速为0.798 mL / min，去离子水流速为0.002 mL / min，检测波长为230 nm; TTX保留时间：8.5分钟；室温TTX系列标准溶液的制备浓度分别为10、20、45、50、75和100μg/ mL，根据“ 2.2”的色谱条件，每次进样量为10μL，恒温阀芯峰面积记录在这些色谱条件下的每个系列标准毒素。过在纵坐标上取峰面积并在横坐标上取河豚毒素浓度，图14示出了用于通过高效液相色谱法测定河豚毒素的标准曲线。3.如图3所示，TTX在20至100μg/ mL的范围内具有良好的线性关系：线性回归方程为y = 680.93x-4，544.20，相关系数为从0.995。“ 2.2”所确定的色谱条件下，将10μl未知浓度的TTX样品注入液相色谱仪，确定未知样品的峰面积并计算样品浓度。用图3的标准曲线y = 680.93 x 4，544.20采样;最佳膜组件的毒性传感器用于测量未知样品1000稀释后的电流差ΔI。准曲线的回归方程为y = 0.002 5x 0.012 2，从这样就可以计算出稀释样品的浓度。
同未知样品的测量结果示于表2中。种方法的结果均通过SPSS软件进行测试，以确定显着性t检验。以看出，P＞ 0.05，两者之间的差异不显着，且两种方法与样品具有良好的一致性。测试测试了10μL的细菌悬浮液，其中包含0％，1％，2％的三种微生物组装传感器对河豚毒素有反应，结果表明这三种微生物传感器可以满足微生物测试的毒性要求。生物传感器，10μL地衣通过在1％的辅助材料中添加芽孢杆菌悬浮液而组装而成的传感器可提供最佳性能。实验室条件下通过高效液相色谱法测定TTX的毒性，最佳色谱条件如下：分析柱：ODS柱（150 mm×6 mm，5μm），恒温阀芯流动相：乙酸去离子水，流速为0.798mL / min和0.002mL / min，检测波长为230nm，TTX保留时间为8.5min。境温度；在这些色谱条件下，TTX的浓度为20〜100μg/ mL，在该区间内线性关系良好。性回归方程为y = 680.93x-4，544.20，相关系数为0.995。时，使用肉毒杆菌毒性微生物传感器和对象的高效液相色谱法测定了未知浓度的TTX的毒性。较结果，高效液相色谱法和微生物传感器的结果吻合良好：建立的微生物传感器方法可以确定河豚毒素的浓度，但仍有许多空白有待研究，例如传感器。定性和响应范围，微生物膜固定技术的优化等可能对下一阶段的研究至关重要。
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