目的开发基于石墨烯/多壁碳纳米管用于检测IgM抗体风疹病毒（RV-IgM抗体）的电化学传感器和评价其分析性能。法将抗原固定化在氧化石墨烯风疹（GS），脱乙酰壳多糖（CHI），多壁碳纳米管（MWCNT），六氟磷酸盐，1-丁基-3-甲基咪唑氯化物（[BMIM ] [-NH 2与生物材料改性，如PF6纳米材料丝网印刷电极]）的面积，纳米 – 金离子或硫 – 碲，和与辣根过氧化物酶体密封，制成电化学传感器用于搜索。层修改之后使用循环伏安法测试传感器电极，恒温阀芯并且优化传感器以确定传感器的最佳实验条件。最佳实验室条件下评估传感器的分析性能。果各种生物材料层组装裸电极后，电极的峰值电流逐渐增加，然后抗原和辣根过氧化物酶的涂层降低了电极的响应电流。极。
感器的最适pH和H2O2浓度分别为7.0和8.0 mmol / L，最适温度和培养时间分别为35.0°C和30 min。夜RV-IgM抗体的重现性和精确度分别为3.4％和4.9％，0.1至300微克/毫升的线性范围，40 FG / ml的检测极限，以及恢复97 ，5％。地。论在最佳实验条件下，组装的电化学传感器具有以下优点：高灵敏度，精确度和准确度，快速，简单且可量化的溢检测风疹病毒的现有方法。
墨烯/碳纳米管有多个壁;电化学传感器风疹病毒; IgM抗体[分类号] R511.203 [文档代码] A [项目编号] 1673-7210（2017）05（b）中-0177- 04 [摘要]目的开发基于碳的碳纳米管的电化学传感器石墨烯的多壁用于检测病毒的IgM抗体对风疹和评价其分析性能氧化的石墨烯的方法（GS），脱乙酰壳多糖（CHI），纳米碳的多壁管（MWCNT），六氟磷酸1-丁基-3-甲基咪唑（六[BMIM] [PF6] -NH 2），金纳米颗粒和硫堇基于生物纳米材料被用来通过自组装层来修改印刷电极层，然后，风疹的抗原固定在电极组件的表面上，然后盖上辣根过氧化物酶和最终通过层形成在此étude.L’électrode组件中使用的电化学传感器，层，是伏安扫描循环检测其电化学效率。件在最佳实验条件下评估传感器的分析性能：用上述实验材料评估传感器的后续性能，电极的峰值电流和电导率逐渐增加。化的最佳温度和持续时间分别为35.0℃和30分钟。之间的重复性和准确性最佳孵育值和H2O2浓度分别为7.0和8，分别为0 mmol / L. IgM抗风疹抗体检测分别为3.4％和4.9％，线性范围为0.1~300μg/ ml，检出限为40μg/ ml，恢复率为97.5％。传感器具有良好的抗干扰性能结论在最佳实验条件下，用于检测风疹病毒的组装的电化学传感器具有更高的灵敏度，准确性和最佳精度，一个优点与现有方法相比，简单快速的操作以及可量化的方法。[关键词]多壁碳纳米管;电化学传感器;风疹病毒;怀孕期间的IgM内分泌和免疫状态的变化以及风疹感染的风险也增加，导致流产或胎儿畸形甚至死产[1]。管风疹疫苗的普及在预防其感染中起重要作用，但体内抗体随着时间的推移逐渐下降。前，中国每年约有4万名新生儿患有先天性风疹综合症。前，所使用的实验室方法来检测风疹病毒主要是ELISA和化学发光，但是这两种方法的敏感性低的缺点，一个长的检测时间和无法实时检测。年来，电化学immunodétecteurs被逐渐应用到疾病的诊断由于其高灵敏度，它们的特异性和它们的量化：检测病毒抗原的检测极限高达30皮克/毫升。2]它已被开发用于检测风疹病毒的IgM抗体。化学免疫传感器（RV-IgM）可以克服当前实验方法的缺点。器和材料电化学仪器工作站购自上海晨华公司，H-7500透射电子显微镜购自日本日立，一次性丝网电极购自ZensorRD来自台湾。壁碳纳米管材料（MWCNT）（批号20131123）购自成都有机化学有限公司;石墨烯（批号20140315）购自咸丰纳米科技有限公司;氟磷酸盐1-丁基-3-甲基-6-。上海晨杰化工有限公司购买;壳聚糖（CHI），辣根过氧化物酶，过氧乙酸购自上海圣工生物科技有限公司;硫磺，氯金酸（批号20150308）购自美国Sigma。
疹抗原（批号20151103）购自美国Meridian，IgM风疹标准（批号20151016）购自NIBSC。有试剂均为分析纯。法和电化学方法制备immunosenseurs的离子液体的石墨烯（GS- [BMIM] [PF 6]），GS- [BMIM] [PF 6]的结果和bioprotectants剂CHI，MWC根据文献[3-5制备]。-NT混合物纳米复合MWCNT-CHI-GS [BMIM] [PF6]，得到将混合物沉积在印刷电极的工作电极的表面上的溶液，1天自然干燥。后，纳米 – 金离子和硫已经保藏MWCNT-CHI-GS [BMIM] [PF6]改性的丝网印刷电极的表面上，并在37℃下自然干燥1一天，然后重复三次。后，将8ng风疹抗原包被溶液滴加到电极表面，空气干燥过夜，用蒸馏水冲洗以除去未结合的抗原和5μl。滴加入0.25％HRP溶液用于封闭并储存在4℃的冰箱中。过石墨烯和纳米金的透射电子显微镜测量传感器性能。用循环伏安法在含有0.1mol / L氯化钾的5mmol / L Fe（CN）63/4溶液中，从0.1V至0.7V扫描改性层电极。（扫描速度为0.05 V）。/ s），获得不同的循环伏安图。验条件的优化在不同pH溶液和H2O2溶液浓度下检测传感器电极响应电流，最高响应电流，pH值和H2O2浓度最佳峰值电流最大化孵育温度，孵育时间，孵育温度和电极响应电流最低的时间是最佳的。化学免疫传感器的分析性能测试在上述实验中获得的最佳实验条件下测试组装的电化学传感器的性能。准曲线和检测限的制备检测使用开发的电化学传感器，在最佳实验条件下测试不同的RV-IgM标准浓度，并以线性方式分析实验数据。相同条件下，测试空白测试溶液并重复3次以计算检测限。确度测试在一天内测量100U / ml RV-IgM的浓度3次，并且连续进行测试5天，分别计算测定内和测定间的精确度。证准确性：使用浓度为100U / mL的0.1ml RV-IgM标准物作为补救标本和不含RV-IgM作为空白的生理盐水溶液和管使用开发的传感器连续测试实验和空白管三次。均值是实验回收浓度和背景浓度，标准浓度用作标准浓度来计算回收率，回收率=回收浓度/标准浓度×100％。过添加0.1mL的10μg/ mL单噬菌体病毒IgG，类风湿因子和人乳头瘤病毒IgG作为干扰来进行干扰实验。100U / mL的RV-IgM溶液作为实验管。用相同浓度的不含干扰物质的RV-IgM溶液作为测量对照管。计方法统计分析上述数据使用统计软件SPPS 19.0进行，恒温阀芯表示为平均值±标准差（X±S），并且通过比较含药物的实验测量管的结果干扰实验中的干扰。对t检验，P <0.05，干扰是可以接受的。果多壁碳纳米管的纳米复合材料-GS-吹水[BMIM] [PF 6]透射型电子显微镜的分析结果示于图。1.传感器性能测试结果一旦纳米材料分层，就以0.05V / s的扫描速率扫描电极。得的循环伏安图显示在图2中。以看出，随着改性材料的增加，电极电流逐渐增加。
化实验条件优化实验反应体系的最佳pH值，H2O2浓度，培养时间和温度：最佳pH值为7.0，最佳H2O2浓度为8培养温度为35.0℃，最佳培养时间为30分钟。图3-6。性能测试和标准电化学免疫检测限曲线的回归方程分析结果为Y = 5.41313 0，2776X，相关系数为0.98，线性范围为0.1至300μg/ ml，检出限为40μg/ ml。见图7.电化学免疫传感器精度测量结果再现性精度，测试精度和昼夜精度计算如下：3.4％，4.1％和4.9％，分别。化学免疫传感器校正测量的准确度分别为97.8和0.03 U / mL，而计算的回收浓度（回收浓度 – 背景浓度）和回收率为97， 5 U / mL。97.5％。干扰测试的结果表明，该控制管的浓度为（89.96±3.52）U / mL和在试管中含IgG，类风湿因子和干扰与物质的浓度人乳头瘤病毒IgG为（90.52±3.51），（分别为89.87）。±3.12），（90.78±3.76）U / mL，对照管中的浓度与上述实验管中的浓度之间的差异无统计学意义（均P> 0.05）。论CHI含有大量羟基和氨基的，具有用于生物大分子和小的有机分子具有高的吸收能力，并且具有生物相容性，渗透性和膜形成良好，但导电性差和石墨烯目前可用。薄的二维材料已知具有高的表面积（2630平方米/ g）和电导率[8-9]类似于MWCNT，但它是不溶于水且易于聚集。该研究中，[BMIM] [PF6] -NH2与石墨烯反应以解决该问题，并获得均匀溶解的离子液体石墨烯。墨烯，MWCNT和纳米金的添加可以补偿CHI的不良导电性。修饰电极层的循环伏安图表明，该CV图表被组装之前由扁平的一对氧化还原峰曲线的由于不存在电子介体的，和的峰值电流通过逐层改性逐渐增加电极。果表明，电极改性后电极具有良好的电化学性能。于pH和H2O2浓度不足会影响抗原和抗体的活性，抗体的温度和孵育时间也会影响抗原 – 抗体结合的效率。
而影响整个体验的效果。此，有必要在上述条件下进行优化实验。项研究的结果表明，最佳实验条件下，在电极电流的检测响应具有RV-IgM的浓度的对数的好呈负相关。现有的检测方法相比，它具有更高的灵敏度（检测限为40 fg / mL），更高的准确度和准确度[11-12]。
果使用完成的电极，则完整的检测时间可以减少到30到40分钟。此，该方法是检测RV-IgM的良好方法。而，组装的有限免疫电极的稳定性可能影响测试结果。目前为止，我们还没有在这方面做过任何研究。果完成的免疫电极在4°C时的稳定性可超过6个月，则可广泛用于抗RV IgM。床试验
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