烯丙基-1，3，5-三嗪-2，4，6（1H，3H，5H）三酮的合成是一个功能性单体，三聚氰胺是一种分子模型和乙二醇二甲基丙烯酸酯是一种交联剂。Surface Plasmon Resonance（SPR）传感器芯片上合成分子印迹聚合物膜。据压印聚合物的Langmuir方程，蜜胺和分子印迹聚合物之间的结合常数计算为140×108 L /摩尔。传感器具有高选择性VIS-à-VIS的分子模型mélamine.ApH值= 75，传感器响应与01Symbolm @@ 100 nmol / L的（R = 09 991）的线性范围更好三聚氰胺。传感器已被用于在牛奶和奶粉三聚氰胺检测，检出限分别为626 pmol / L至564皮摩尔/ L（S / N = 3）和915％至920％。聚氰胺;分子印记;表面等离子体共振传感器引言三聚氰胺（MM）是一种重要的杂环有机化合物三嗪，其可在生产三聚氰胺 – 甲醛树脂的使用，并且被广泛用于塑料，涂料和木材。型，造纸，皮革和电力行业。MM分子含有高达667％的氮，因此被不法商人用于食品和饲料中以增加产品的氮含量。据美国食品和药物管理局的标准，MM的每日最大摄入量为063 mg /（kg·bw）[1]。通知卫生部2011年第10号，题为“关于三聚氰胺在食品中（第10号，2011）存在的限制通知”中指出，在婴幼儿配方奶粉三聚氰胺极限1毫克/千克和其他食物中的三聚氰胺。限值为25 mg / kg [2]。期使用MM可导致肾结石，甚至引起膀胱癌或肾功能衰竭[3，4]。果，食品中MM的检测引起了极大的关注。前，MM检测方法包括高效液相色谱，高效液相色谱质谱和气相色谱质谱[5，6]，比色法[ 7，8]，表面的酶免疫测定[9，10]。曼方法得到改进[11，12]等。而，由于食物基质是复杂和MM含量低，大部分的前处理工艺的方法是繁琐的，这是通常需要进行样品富集，这需要很长的时间并且很费力。此，有必要在开发前具有良好选择性和高灵敏度的简单检测方法。年来，表面等离子体共振（SPR）已经吸引了，因为它的简单，快速，缺乏礼仪和高灵敏度的广泛关注。SPR传感器已广泛应用于生命科学[13-16]。而，恒温阀芯SPR传感器通常需要使用昂贵且不稳定的配体分子，如抗原或受体的识别目标分子，其可通过设计便宜的探针和与稳定的识别位点被克服[17]。子印刷技术可以提供特异性结合位点[18]。刷聚合物具有高化学稳定性，低成本，简单的制备和可回收性[19]。
此，结合RPS和分子指纹技术的优点，可以有效地提高靶标的检测灵敏度和选择性。们小组开发了一系列SPR的指纹传感器的前期工作，并已成功地用于复杂样品[17，20〜23]在目标检测的一部分。这些当中，双酚A传感器用4-乙烯基吡啶作为功能单体和双酚A的检测方法制备测定[17];使用甲基丙烯酸作为功能性单体制备3.3二氯联苯胺传感器。用于检测自来水和土壤样品中的3，3二氯联苯胺[22]。据蜜胺的分子特征，本研究设计并合成烯丙基-1，3，5-三嗪-2，4，6（1H，3H，5H）三酮，其可以通过氢键键合有效地结合到一个MM官能单体。分子印迹技术已被用来修改三聚氰胺分子印迹聚合物的SPR传感器芯片上，并建立用于检测MM的SPR分析方法，该方法是非常重要的用于检测以及环境和食品样品中MM的分离。器和实验试剂表面等离子体共振FTSPR 100，金检测（18厘米×18厘米）（热，USA）; Mercury Plus 400核磁共振（瓦里安，美国）。二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA），苯基三聚氰胺，碳酸二乙酯（分析纯，Aldrich）;偶氮二异丁腈（AIBN，分析纯，天津北联精细化工有限公司）;丙硫醇（70％，上海精春试剂有限公司）; MM（化学纯，上海试剂1号）;氰尿酸（化学纯），缩二脲（分析级）（阿拉丁）;亚砜（DMSO，分析纯，天津BASF化工有限公司），丙烯酰胺（分析纯，成都最佳试剂有限公司），乙腈（纯粹色谱，天津永达化学试剂有限公司）。
验用水是双蒸水。SPR实验之前，将所有溶液通过045μm醋酸纤维素膜过滤。验方法合成和官能单体的表征（1）nitrobiuret的合成[24] 375毫升浓H 2 SO 4和90ml浓硝酸的放置在烧杯中，并冷却至0℃。加入150克缩二脲后，将混合物在冰浴中搅拌1小时，并在室温下搅拌直至固体完全溶解。入300克冰，在室温下搅拌并抽吸过滤。所得固体溶于水中，用1mol / L NaOH调节至pH 85，过滤并用37％HCl调节至pH，抽滤并真空干燥。到产物，为白色固体，80g，收率37％。点：231℃; 1H NMR（400MHz，CDCl3）δ：7180（1d，2H），9334（1H NMR，1H）; 13 C NMR（400MHz，CDCl 3）δ：147765（CO），15301（CO）; IR（KBr压）ν：3426，3290，2974，2807，1736，1631，1576，1489，1431，1386，1335，1201，1073，1015，957，758，598，503 cmSymbolm @@ 1.ν：3442， 3227，3100，2955，1770，1590，1460，1398，943，760 cmSymbolm @@ 1.制备分子印记的SPR传感器的传感器三聚氰胺制备方法SPR分子印迹三聚氰胺示于图1。检测条裸SPR是在2分钟新鲜制备的食人鱼（H2SO4H2O2，70:30，v / v）的溶液中洗涤芯片用水冲洗，在氮气下干燥，并放置在含有10mmol / L烯丙基硫醇的混合物。于4℃的乙醇溶液中过夜。乙醇和水反复冲洗并用氮气干燥。
取2090mg功能性单体和120mg MM，溶于7mL DMSO中，静置2小时，形成稳定的复合物。后，加入590毫克AIBN及1577毫克EGDMA的，和上述检测的部分或有放置，密封，用氮气脱气15分钟，聚合反应在60℃开始C持续24小时。去金片，并用甲醇和水洗涤所述芯片的表面上，然后在2％和18％甲醇放置在乙酸溶液以除去模板分子和未反应的化合物。无水乙醇和水洗涤金薄片并用氮气干燥。备未印刷的聚合物芯片的方法与上述方法相同，只是不添加MM。备实际样品提取奶粉的样品：取50000克奶粉，加15ml甲醇，并提取在室温下超声15分钟。10，000rpm离心3分钟后，将上清液在减压下蒸发至干，并溶于50ml磷酸盐缓冲液（PBS，pH = 75）中。液体牛奶的样品的提取：500毫升的纯牛奶置于50毫升，加入10毫升乙腈中，进行1分钟搅拌离心管中，离心以10，000转/分钟进行3分钟，并将上清液在50ml PBS（pH = 75）中蒸发至干。号@@ 1或更大，入射角具有最小的反射率。照实验的温度为25℃，将缓冲溶液流量为PBS（02摩尔/ L Na2HPO4NaH2PO4，pH值= 75）。
于识别位点与三聚氰胺的氢键，选择2％的乙酸溶液和18％的甲醇作为再生液。次试验前，金硬币检测RPS的混合物在286毫升/分钟的流速和再生波的稳定化用PBS后迅速下降，直到基线RPS数漂洗稳定。试物质的各种浓度的溶解在运行缓冲液和直到波数变化达到一个值的流量已被输入到以0225毫升/分钟的流速流动池稳定，FTSPR实时记录波数变化（图2）。果与分子印迹三聚氰胺的厚度的讨论计算膜上的电镀膜或传感带被首先连接到通过链路AUS的双功能分子allylthiol，然后通过结合的双键烯丙基硫醇在功能分子的烯丙基末端。子印迹聚合物涂层。3是一个裸金板的SPR光谱和在磷酸盐缓冲液的上印记聚合物（MIP）和非印迹聚合物（PIN）的修改后金板。比于裸金，波数MIP黄金和PIN已被转移到31347和18336 cmSymbolm @@，各表示形成在表面上印刷和未印刷的聚合物有一定厚度传感器。据[26]中的厚度计算方法，MIP和NIP金片的膜厚分别为约78和46nm。
pH值对吸附性能的MM识别由印迹聚合物的效果主要取决于氢键的羰基，并在识别位点的亚氨基和氨基，并在所述杂环氮之间的互补MM的分子。pH值可能影响压印聚合。体对MM的识别灵敏度。出的两个与蜜胺的弱碱性化合物之间的氢键，在pH范围的分子印记的三聚氰胺传感器的从65-85到90 nmol / L的MM的响应被确定。图4所示，当pH为75时，波数的位移越大，表明与印迹聚合物在识别位点的氢键键合是在该值的最强pH值。此，在该实验中选择pH = 75。聚氰胺，评价对靶分子蜜胺的分子印迹聚合物的吸附能力，以及MIP和NIP传感器芯片的性能的分子印迹聚合物的吸附在pH条件确定最佳。5示出了MM浓度为01 nmol / L的〜30摩尔/ L和波数的移动范围与增加concentration.Lorsque的浓度大于30个微摩尔增加/ L，波数移动不变，表明此时吸附。和。芯片MIP传感器达到饱和，为13cm的波数Symbolm @@ 1，当饱和芯片PIN的波数的位移的位移为26cm @@符号1.据说MIP芯片由于印迹效应对三聚氰胺具有更好的吸附效果。图5的框，当MM浓度为01和nmol / L的间100中，响应号码MIP芯片波MM具有浓度良好的线性关系。程式为v（cmSymbolm @@ 1）= 08083 0 4460 CM（纳摩尔/ L）（R = 09 991），检出限为426皮摩尔/ L（S / N = 3）。中v和VSAT表示的波数和波数变化MM达到饱和的吸附后的变化，和卡斯是GM和所述分子印迹聚合物之间的结合常数。据图5的结果，Langmuir方程的印迹聚合物如下：1V = 011 7798×10 Symbolm @ 10 [MM]（R = 09 979）。距与线性方程的斜率之间的比率给出Kass = 140×108L / mol。力学参数.DELTA.G @ Symbolm = 465千焦耳/可以从.DELTA.G = Symbolm @@ RTlnKass和.DELTA.G <0而得到的印迹聚合物和MM之间的连接的摩尔表示链路和MM网站之间的连接印刷的聚合物是自发的。程。感器可在用2％乙酸和18％甲醇的溶液再生后重复使用。
11次重复90nmol / L MM的传感器的相对标准偏差为21％。表明传感器具有更好的稳定性和更好的再生效果。子印迹聚合物的三聚氰胺的选择性通过用的40 nmol / L的和它的三个结构类似物，氰尿酸，苯胍胺和鸟苷及其浓度MM的分子印迹研究。应SPR传感器芯片。可以在图6中，随着PIN芯片相比，芯片MIP显示了模板分子的高选择性可以看出，指示用于识别所述模板分子的特定结合位点内形成在印刷过程中聚合物的含量，以及确定场地结构的尺寸。
能性碱基和靶分子的位置对应，但不对应于其他三种化合物。际样品分析为了通过SPR法分子三聚氰胺足迹测试实际样品的分析的可行性，所述MM标准溶液加入到牛奶和在粉末牛奶样品提取物获得MM 20nmol / L的终浓度，并进行SPR分析。表1所示，牛奶和奶粉中MM的平均回收率分别为915％和920％。SNR等于3，牛奶和奶粉检出限分别是626皮摩尔/ L（79纳克/千克）和564皮摩尔/ L（71纳克/千克），它是小于在GB / T 223882008.最小量化的005毫克/公斤[5]和GB / T 224 002 008固定在005毫克的检测极限/ kg的[6]，并在广告指定的限制值来自卫生部[2]。论烯丙基-1，3，5-三嗪-2，4，6（1H，3H，5H）三酮的合成作为功能性单体和MM用作模型分子用于制备SPR传感器分子三聚氰胺足迹对于牛奶和MM奶粉样品中的检出限为626 pmol / L至564皮摩尔/ L国家标准方法相比，该方法具有高的选择性和灵敏度，可用于用于分析复杂样品中的MM。全和风险的RéférencesUSFDA中期评估有关三聚氰胺及其类似物的食物对于人类来说https：//开头wwwfdagov / OHRMS /日程/ 98fr / FDa2008n0574bkgpdf，广告2008年第10号，在食品中三聚氰胺的限量版的健康公告卫生部食品三聚氰胺卫生中国，2011公告卫生部的部限制的公告第10号，2011卫生部在2011年JL多恩，Doerge DR，Vandenbroeck先生，FinkGremmelsc M，W Mennesd，Knutsene HK Vernazzaf˚FCastleg L，L Edlerh，本福德d，毒理学申请药理学，2013，270（3）：218- 229Hsieh TJ PC谢蔡YH，乌CF，CC刘，林Y.吴MT毒理学科学2012，130（1）：17-32GB / T原料乳与乳制品国家标准的三聚氰胺223 882 008测定中华人民共和国原料奶和产品中的三聚氰胺它的乳制品。家标准GB / T 223882008GB / T 224 002 008在原高效液相色谱法测定奶粉中国快速检测液相色谱法生鲜乳国标三聚氰胺的中华人民共和国国家标准三聚氰胺的快速测定GB / T 224002008L’Assistance：F，林R，S成，吕的App物理学快报，2010，96（13）：1337021337023Wu Z，赵H，薛Y，曹Q，杨洁，他Y，李X，Bioélectron元žBIOSENS，2011，26（5）：2574-2578Cao B，羊1H，J歌曲，常H，李S，邓甲Talanta，2013年，116（22）：173-180JooheeçYoungteck K，分析师Jihoon大号，2010，135（9）：2445-2450Li R，羊G，杨洁，汉Ĵ，刘俊，黄呒食品控制，2016，68：14-19QU甘张灌南，SU严，XU回春，周晓东沉爱国，胡继明中国分析化学，2014年，42（7）：1022年至1027年瞿咖嗯，张灌南，苏岩蓣挥淳，周晓东，申哀猓胡继明，分析化学，2014年，42（7 ）：1022-1027Singh P Act ionneurs方向B，2016年，229（3）：110-130Kumar S，夏尔马G，Singh诉选项光纤TECHNOL，2014，20（4）：333-335JING菁，王杨，WEI中国天鑫分析化学，2016年，44 （8）：1057年至1164年丽景荆，羊，卫天心分析化学，2016年，44（8）：1057-1164Navarrete MC，DíazHerreraN，GonzlezCano A，瘢痕埃斯特桑斯致动器B，2014，190（1）： 881-885Zhu C，张L，陈C，周Ĵ肛门快报，2015年，48（10）：1537-1550Shrivastav AM，古普塔BD IEEEĴSEL顶定量，2015年，22（4）：172-178Sener G，L乌尊说R，致动器乙德尼兹利甲桑斯，2011，160（1）：791-799Wei C，周H，周ĴTalanta，2011，83（5）：1422-1427Zhao N，陈C，周Ĵ执行器B， 2012 s166167（6）：473-479Zhou C，高Ĵ，张L.，周Ĵ肛门詹ACTA，2014年，812（812）：129-137LI洁，陈长宝，丽丽ZHANG，杰周Ĵ分析科学，恒温阀芯2014 30（6）：873-878李杰，陈长宝，张丽丽，周杰，分析科学学报，2014，30（6）：873-878Plater MJ，JP辛克莱，艾肯S，T Gelbrich，赫斯特房子MB四面体2004年，60（30）：6385-6394ArrachartģCarcelÇTrens镇P化学欧元Ĵ2009年，15（25）：6279-6288Corn RM手册振动光谱的Weibel SC，纽约：威利， 2002：1057年至1064年吸附原则与反应Masel RI纽约：固定在芯片表面上的表面等离子体共振威利INTERSCIENCE，1996240-241Résumé膜三聚氰胺印记聚合物（MIP）（用乙二醇二甲基丙烯酸酯和烯丙基作为官能单体和交联剂制备SPR）。印刷膜对三聚氰胺分别基于所述截距的以Langmuir方程的印记聚合物的斜率的比值，缔合常数（卡斯）印刷位点为140×108升/ mol。示高选择性的基质分子的SPR传感器，三聚氰胺，获得pH为75的最佳响应的方法，显示出三聚氰胺浓度良好的线性范围为01至100 nmol / L的（R = 09 991 ）。的信号，以3信噪比的基础上，检测三聚氰胺限分别为626 pmol / L至564皮摩尔/升奶和奶粉。奶的回收率分别为915％和奶粉的回收率为920％。些结果表明，MIP-edmed Ed是一种有前景的替代方法，用于检测三聚氰胺关键词三聚氰胺;分子印刷;表面等离子共振传感器
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