在本文中，酶标记板用作测定平台，丝网印刷芯片电极用作检测装置以构建电化学核酸适体传感器。生物素修饰的核酸适体被固定在涂有链霉亲和ELISA板，并通过核酸适体修饰硫醇官能化纳米银被用作探针。夹心夹层反应之后，添加银增强溶液并且通过纳米银催化银沉积物以在孔板中形成大量银沉积物。
通过酸溶解形成银沉积之后，插入印刷的芯片电极并通过方波阳极溶出伏安法测量释放的银离子。的峰值电化学洗脱与PDGF-BB的浓度相关，因此允许定量测定PDGF-BB。分析方法对PDGF-BB有效，线性范围为3.12~200 ng / mL，检出限为1.23 ng / mL，特异性良好。
体核酸，传感器，纳米技术和对定性和定量检测与疾病，在医学诊断，治疗和研究领域必不可少的相关蛋白的新的分析方法的开发。抗体相比，核酸适体具有化学稳定性高，合成简单，易于修饰的优点，适用于各种分析方法的分子工具的开发。此，在研究人员设计各种生物分析方法时，核酸适体已成为更有效的选择[1]。年来，在生物传感器结构，作为所述生物体成分和各种分析方法已被开发，如荧光生物传感器，比色生物传感器和电化学生物传感器中使用的核酸适体。
4]。化学检测的优点与识别核酸适体特异性的能力及其在传感器中的应用的组合已成为当前研究的焦点。于独特的优势没有其他电极，所述电极丝网印刷芯片具有以下优点：成本低，灵敏度高，重现性好，一次使用时，用于分析诊断提供新的平台医疗。各种纳米材料标记物中，纳米银颗粒具有更好的电化学活性，因为它们更可能被氧化，因此更适合作为检测探针。这项研究中，多井板被用作分析平台和一个丝网印刷的电极芯片用作构建电化学传感器核酸适体的检测装置。体核酸通过生物素改性已经固定在涂有链亲和素的多孔板中，并通过核酸适体修饰硫醇官能化纳米银被用作探针。心夹层反应后，添加银改善溶液，在纳米银催化剂孔板中形成大量银沉积物。
为通过溶解酸溶液形成的银沉积物，通过方波阳极绞合伏安法测量释放的银离子，以获得PDGF-BB的定量测定。霉抗生物素蛋白试剂和仪器（北京博鳌生物科技有限公司）; PDGF-BB（MW = 24800Da，RD System，Minneapolis）;牛血清白蛋白，硝酸银，硼氢化钠，吐温20），KCl，恒温阀芯氯化镁，抗坏血酸（Sigma-Aldrich公司，美国）。H2SO4，HNO3，KNO3，NaCl，Na2HPO4，KH2PO4（南京化学试剂有限公司）; 96孔板（上海圣工生物有限公司）。网印刷的芯片电极由制造商自己制造，所用的水是超纯水。CIII1232B便携式电化学工作站（上海晨华）。
实验中所要求的缓冲溶液如下：1×PBS（NaCl的137mM的，氯化钾2.7mM的磷酸氢二钠，KH 2 PO 4 2毫米，pH值= 7.4），1×PBSM（PBS 1×，MgCl 2的1毫）; PBST（1PBS，5）％Tween-20）：市售的不含蛋白质的封闭缓冲液（Tris缓冲液作为溶剂，pH = 7.4）;碳酸钠缓冲溶液（pH = 9.6）。使用的适体核酸如下：AAAAAAAATACTCAGGGCACTTGCAAGCAATTGTGGTCCCAATGGCTGAGTAT，其5“端已被硫醇基（巯基修饰的核酸）改性。“-AAAAAAAATACTCAGGGCACTTGCAAGCAATTGTGGTCCCAATGGGCTCTGAGTAT，其5”端被修饰用生物素（适体核酸的修饰的生物素）。
验步骤制备用适当修饰的核酸适体功能化的纳米银。搅拌下将硝酸银和硼氢化钠（体积比1：3）滴加到冰浴中并混合，继续搅拌直至回收。境温度要由所述核酸适体制备官能纳米银，通过硫醇改性至10微米的浓度的核酸适体的100微升用1mL合成纳米银的混合。上述溶液用盐溶液老化，分批加入NaCl直至浓度为0.2M。育42小时后，用乙醇洗涤3次。冲溶液1×PBS，最后分散在1×PBSM缓冲溶液中。不使用由硫醇基团修饰的纳米银官能核酸适体，它被存储在4℃的PDGF-BB的分析在多孔板100微升链霉亲至5毫克/毫升（将溶解在碳酸钠缓冲溶液（pH = 9.6）中的溶液加入到96孔板中，在4℃温育并静置过夜。每个孔与100μL无蛋白质的封闭缓冲液在37℃下孵育1小时以除去非特异性吸收并用PBST缓冲溶液洗涤3次。
后200与生物素（1×PBS缓冲液），其具有200nm的浓度PI修饰的核酸适体加入到各孔中，将反应物在37℃下进行1小时，用然后用PBST缓冲溶液洗涤3次。同浓度的PDGF-BB（1×PBSM缓冲溶液）加入到每个反应孔，将反应物在37℃下进行，然后用PBST缓冲液，以除去未结合的PDGF-BB洗涤3次。
后，100微升纳米银与硫醇酸改性的适体官能化加入到每个孔中并在37℃下反应1小时以形成由生物素在井修饰的核酸适体， PDGF-BB，用硫醇修饰的核酸。体官能化纳米银是三者之间的夹心型复合物。PBST缓冲溶液洗涤每个孔3次并使用。0.4mmol / L硝酸银和0.2mmol / L抗坏血酸（1/1体积）的混合物加入到反应的每个孔中，并在黑暗中放置10分钟。钟。旦反应完成货币存款，将孔用水洗三次，将100μl具有1摩尔/ L的浓度的硝酸添加至各排出后孔，和存款将得到的银在室温下溶解。
应100微升的KNO 3在加入到各混合物puits.Après的1M的浓度完成后，打印的芯片屏幕的电极已被插入到孔中并连接到电化学工作站，并通过方波阳极溶出伏安法测量溶液的银离子。
过方波伏安法在-0.4和 0.4V之间以0.5V的浓度扫描电极10分钟，并记录峰值电流。值电流浓度的对数与PDGF-BB的浓度线性相关，因此允许定量测定。果与讨论检测原理基于在本研究提出银催化的纳米银的沉积电化学核酸多孔银板的传感器适体在图1中首先示出通过聚苯乙烯吸附将链霉抗生物素蛋白包被在pH = 9.6的碳酸钠缓冲溶液中的多孔板中。将生物素修饰的核酸适体添加到5’末端后，可以通过生物素 – 抗生物素蛋白之间的特异性结合将适体固定在孔板的表面上。在5’末端用硫醇修饰的核酸适体功能化的纳米银用作检测探针。用夹层型的夹心法传感器检测模式：PDGF-BB具有用于结合适体，从而形成适体修饰型生物素在板，PDGF-BB，巯基修饰两个活性位点。酸适体使三个三明治之间的纳米银夹层功能化。针中的纳米银具有良好的催化活性和能催化抗坏血酸的反应，以减少硝酸银，由此形成大量的孔隙内的银沉积物。积的银用HNO 3溶解，并且大量银离子释放到系统中。
网印刷芯片电极插入在孔板，连接到移动站的电化学工作和计算机，和溶出伏安法用方波阳极是用于定量测定由所产生的金额反应系统，从而实现PDGF-BB的定量。定。析性能标准曲线法用于定量分析不同浓度的PDGF-BB。
PDGF-BB内容与提供的由argent.Comme催化的银沉积反应所产生的钱洗脱峰电流值，溶解的峰值当PDGF-BB的浓度增加时，银增加（参见图2A）。感器的标准曲线在图中示出2 B.在该图中，峰值电流的值被线性相关PDGF-BB的浓度的对数和线性范围为3.12和200之间毫微克/毫升。准曲线的线性回归方程为（UA）= 3.965〜1.39日志C（毫微克/毫升），其中C是PDGF-BB的浓度，洗脱峰的峰值电流的值从银行传感器和线性相关系数R = 0.976 4.用信号的3倍信噪比钱，传感器检测极限计算为1.23毫微克/毫升。检测限适用于医学诊断中痕量PDGF-BB的测定。了研究该传感器的特异性，PDGF（PDGF-AB，PDGF-AA）的两种异构体，BSA和凝血酶（凝血酶）用作潜在干扰物质，分别为PDGF在50浓度ng / ml。量浓度为1mg / mL的BB，PDGF-AB，PDGF-AA，凝血酶和BSA。果表明，该传感器的电流响应是本只有当PDGF-BB，PDGF-ABprésent.Les响应值，PDGF-AA和凝血酶类似于BSA的结果表明的存款本研究中提出的银基银是基于多孔板电化学核酸适体传感器的特异性良好。
论在该研究中，酶标记的平板用作分析平台，并且丝网印刷的芯片电极用作构建电化学核酸适体传感器的检测装置。体核酸通过生物素改性已经固定在封装在链亲和素微板，恒温阀芯并使用由核酸aptide官能化的纳米银达到PDGF-BB的定量测定巯基修饰的作为一个探索。析方法给出了良好的结果和良好的特异性。
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